Главная » Щеплення » Відмінність виділення чистої культури аеробів і строгих анаеробів
Ротару :В 70 лет выгляжу на 45 благодаря простой методике...
Почему все аптеки молчат? Грибок ногтя боится как огня дешевого...
Алкоголику вместо кодирования подсыпьте незаметно 3-4 капли обычной…
Соломія Вітвіцька: живіт втягнувся за добу, вийшло 22 кг жиру! Їла це ...
Заросли папиллом на шее и в подмышках - признак наличия у вас...

Відмінність виділення чистої культури аеробів і строгих анаеробів

Способи отримання енергії бактеріями (дихання, бродіння). Методи культивування і виділення чистої культури анаеробів.

У середовищі існування бактерій крім биосинтетического повинен знаходитися і енергетичний матеріал. За способом отримання енергії бактерії також прийнято ділити на дві групи: хемотрофи и фототрофи . Хемотрофи використовують енергію окислення різних з'єднань. Залежно від окисляемого субстрату серед хемотрофних організмів виділяють хемолітотрофамі и хемоорганотрофи . Фототрофи для задоволення енергетичних потреб використовують енергію світла.

Способи отримання енергії бактеріями (дихання, бродіння). Методи культивування анаеробів.

Дихання, або біологічне окислення, Засноване на окисно-відновних реакціях, що йдуть з утворенням АТФ-універсального акумулятора хімічної енергії. Енергія необхідна мікробної клітці для її життєдіяльності. При диханні відбуваються процеси окислення і відновлення: окислення - віддача донорами (молекулами або атомами) водню або електронів; відновлення - приєднання водню або електронів до акцептора. Акцептором водню або електронів може бути молекулярний кисень (таке дихання називається аеробним) або нітрат, сульфат, фумарат (таке дихання називається анаеробним - нітратних, сульфатних, фумаратним).

анаеробіоз (Від грец. Aer - повітря + bios - життя) - життєдіяльність, що протікає при відсутності вільного кисню. Якщо донорами і акцепторами водню є органічні сполуки, то такий процес називається бродінням. При бродінні відбувається ферментативне розщеплення органічних сполук, переважно вуглеводів, в анаеробних умовах. З урахуванням кінцевого продукту розщеплення вуглеводів розрізняють спиртове, молочнокисле, уксуснокислое і інші види бродіння.

Стосовно до молекулярного кисню бактерії можна розділити на три основні групи: облігатні, т. Е. Обов'язкові, аероби, облігатні анаероби і факультативні анаероби.

Методи культивування анаеробів.

Для культивування анаеробів необхідно знизити окислювально-відновний потенціал середовища, створити умови анаеробіозу, т. Е. Пониженого вмісту кисню в середовищі і навколишньому її просторі. Це досягається застосуванням фізичних, хімічних і біологічних методів.

Фізичні методи.Засновані на вирощуванні мікроорганізмів в безповітряному середовищі, що досягається:

1) посівом в середовища, які містять редуцирующие і легко окислюються речовини;

2) посівом мікроорганізмів в глибину щільних поживних середовищ;

3) механічним видаленням повітря з судин, в яких вирощуються анаеробні мікроорганізми;

4) заміною повітря в судинах будь-яким індиферентним газом.

Для редукування речовин зазвичай використовують шматочки (близько 0,5 г) тварин або рослинних тканин (печінка, мозок, нирки, селезінка, кров, картопля, вата). Ці тканини пов'язують розчинений в середовищі кисень і адсорбують бактерії. Щоб зменшити вміст кисню в живильному середовищі, її перед посівом кип'ятять 10-15 хв, а потім швидко охолоджують і заливають зверху невеликою кількістю стерильного вазелінового масла. Висота шару масла в пробірці близько 1 см.

Як легко окисляються, використовують глюкозу, лактозу і муравьінокіслий натрій.

Кращою рідким живильним середовищем з редукуючими речовинами є середовище Кітт - Тароцці, яка використовується з успіхом для накопичення анаеробів при первинному посіві з досліджуваного матеріалу і для підтримки зростання виділеної чистої культури анаеробів.

Посів мікроорганізмів в глибину щільних середовищ виробляють за способом Віньяль - Вейона, який складається в механічної захисту посівів анаеробів від кисню повітря. Беруть скляну трубку завдовжки 30 см і діаметром 3-6 мм. Один кінець трубки витягають в капіляр у вигляді пастерівської піпетки, а в іншого кінця роблять перетяжку. У залишився широкий кінець трубки вставляють ватяну пробку. У пробірки з розплавленим і охолодженим до 50 ° С живильним агаром засівають досліджуваний матеріал. Потім насмоктують засіяний агар в стерильні трубки Віньяль - Вейона. Капілярний кінець трубки запаюють в полум'ї пальника і трубки поміщають в термостат. Так створюються сприятливі умови для зростання самих строгих анаеробів. Для виділення окремої колонії трубку надрізають напильником, дотримуючись правил асептики, на рівні колонії, ламають, а колонію захоплюють стерильною петлею і переносять в пробірку з живильним середовищем для подальшого вирощування і вивчення в чистому вигляді.

Видалення повітря виробляють шляхом його механічного відкачування зі спеціальних приладів - анаеростатах, в які поміщають чашки з посівом анаеробів. Переносний анаеростатах є товстостінний металевий циліндр з добре притертою кришкою (з гумовою прокладкою), забезпечений відводить краном і вакуумметром. Після розміщення засіяних чашок або пробірок повітря з анаеростатах видаляють за допомогою вакуумного насоса.

Заміну повітря індиферентним газом (азотом, воднем, аргоном, вуглекислим газом) можна виробляти в тих же анаеростатах шляхом витіснення його газом з балона.

Хімічні методи.Засновані на поглинанні кисню повітря в герметично закритій посудині (анаеростатах, ексикаторі) такими речовинами, як пирогаллол або гідросульфіт натрію Na2S204.

Біологічні методи.Засновані на спільному вирощуванні анаеробів зі строгими аеробами. Для цього із застиглої агарної платівки по діаметру чашки вирізають стерильним скальпелем смужку агару шириною близько 1 см. Виходить два агарових напівдиска в одній чашці. На одну сторону агарної платівки засівають аероб, наприклад, часто використовують S. aureus або Serratiamarcescens. На іншу сторону засівають анаероб. Краї чашки заклеюють пластиліном або заливають розплавленим парафіном і поміщають в термостат. При наявності відповідних умов в чашці почнуть розмножуватися аероби. Після того, як весь кисень в просторі чашки буде ними використаний, почнеться зростання анаеробів (через 3-4 діб). З метою скорочення повітряного простору в чашці живильне середовище наливають можливо більш товстим шаром.

Комбіновані методи.Засновані на поєднанні фізичних, хімічних і біологічних методів створення анаеробіозу.

Особливості та принципи виділення чистих культур бактерій

  • Властивості мікроорганізмів, що враховуються при виділенні культури
  • Методики проведення оцінки збудника
  • Методика Пастера
  • Методика Коха
  • Методика Шукевича
  • Методика Дрігальского
  • Методика Вейнберга
  • Методика Хангейта
  • Мікроманіпулятор

Чистою культурою вважається сукупність мікроорганізмів, що належать до одного виду. Отримання даного матеріалу є необхідним моментом дослідження в виконанні лабораторних діагностичних методик. Для виділення чистих культур бактерій використовують мазки з крові, мокротиння, фекалій, досліджують гнійний, а також інший біологічний матеріал. У природних умовах (у повітрі, воді, грунті), продуктах харчового призначення, в трупах (людських, тварин) містяться асоціації різних видів мікроорганізмів.

Заселення (інокуляція) бактерій на живильне середовище

Відділення чистої культури важливо для докладного вивчення властивостей мікробів: морфологічних, культуральних, біохімічних, а також антигенних. За результатами даних методик дослідження можна встановити належність збудника до певного виду і типу, іншими словами, виконати його ідентифікацію.

Властивості мікроорганізмів, що враховуються при виділенні культури

Принципи біологічного роз’єднання бактерій подразумевают врахування особливостей життєдіяльності мікробів з метою вибрати найбільш оптимальні методи дослідження. Обрані методи повинні відповідати збудника за певними параметрами.

Тип дихання. Серед бактерій виділяють групи аеробних і анаеробних представників. Для отримання анаеробних мікробів матеріал для дослідження прогрівають. Наступний етап – культивування мікроба в анаеробних умовах. Методики отримання аеробних і анаеробних бактерій різні.

Спорообразование. Здатність деяких бактерій до спороутворення забезпечує захист і збереження мікроорганізмів.

Стійкість бактерій до агресивного впливу лугів і кислот. Стійкість деяких видів бактерій до даних речовинам забезпечує максимальне очищення досліджуваного матеріалу від домішки інших бактерій із застосуванням розчинів лугу або кислоти.

Рухливість бактеріальних організмів. Для відділення чистої культури рухливих мікроорганізмів використовуються методи відділення культур мікробів у краплі конденсату.

Чутливість мікроорганізмів до антибіотиків, деяких хімічних речовин та іншим антимікробних засобів. Для деяких збудників найбільш кращі методи виділення культур із застосуванням селективних (специфічних) поживних середовищ.

Антибіотики. Очищають матеріал від додаткових мікроорганізмів.

Здатність бактерій проникати крізь неушкоджені шкірні покриви. Ця властивість властива деяким різновидам, які володіють факторами агресії.

Чутливість тварин до деяких хвороб інфекційного генезу.

Схема виділення чистої культури анаеробних мікроорганізмів

Методики проведення оцінки збудника

Для отримання чистих культур бактеріальних клітин застосовується ряд методів. Кожен з них застосовується в тій чи іншій ситуації і має послідовні чіткі етапи отримання колоній збудника захворювання. Розглянемо найбільш популярні.

Являє собою розведення чистих культур в середовищі для бактеріального росту (рідкої консистенції) до отримання концентрації з 1 кліткою на об’єм рідини. Даний метод виділення має найважливіше історичне значення.

Відома також як методика «пластинчастих розводок». Являє собою розведення матеріалу для дослідження в агарі (в розплавленому стані з температурою 48-50 ° С). Далі отриманий склад розливають по чашках Петрі, де він повинен застигнути.

Посіви зазвичай проводять з 3-4 останніх розведень, оскільки бактерій там уже мало. Таким чином, при зростанні мікробів на живильному середовищі проявляються відокремлені колонії мікроорганізмів, котрі народжуються з єдиною материнської клітини. Потім з глибини агару можна вибрати ізольовану колонію, і пересіяти її на свіже живильне середовище. Наступний етап – ідентифікація і виділення збудника.

Використовується при необхідності виділити чисту культуру аеробів протея або яких-небудь інших мікробів, що характеризуються «повзучим» ростом. Сіють культури на воду, конденсовану біля основи скошеного агару.

При цьому методі відділення чистої культури рухливі клітинні організми (протей) піднімаються на верхівку скошеного агару, а нерухомі форми не змінюють свого розташування на середовищі посіву. Шляхом пересіву верхніх країв пророслої культури, можна вивести чисту бактеріальну культуру.

Спосіб Дрігальского досить широко використовується в дослідженні біологічного матеріалу шляхом розведення культур в пробірці з бульйоном або з фізіологічним розчином.

Етапи виділення чистої бактеріальної культури

Наступний етап: одну краплю отриманого розчину за допомогою стерильного шпателя зі скла розподіляють рівномірно по поверхні середовища харчування в першу чашці. Потім, не пропалюючи шпатель на вогні, роблять їм же посів на другий і третій чаші. Суть методу Дрігальского полягає в тому, що з кожним наступним посівом культур концентрація бактерій (аеробів) все менше. На третьому чашці вони розподіляються досить відособлено, кожна бактеріальна клітина при цьому дає клональні клітини (у вигляді ізольованої колонії). Їх пересівають на скошений агар для накопичення збудників.

Певні труднощі викликає виділення чистих культур анаеробних збудників, якщо мікроорганізми не гинуть при контакті з кисневими молекулами. Суть методики полягає у виведенні анаеробних мікробів (у складі матеріалу) в злегка остигнула (45-50 ° С) розплавленої середовищі харчування (агарозірованной). Проводять 6-10 розведень. Потім йде наступний етап: необхідно швидко охолодити складу в пробірці і залити її поверхню сумішшю з масла вазеліну і парафіну, що перешкоджає проникненню повітря і сприяє розвитку анаеробних умов.

При сприятливому посіві проростають ізольовані колонії на другий день, які можна отримати з пробірки шляхом її нагрівання за допомогою пальника. З розрізаного агарового стовпчика петлею набирають культури для подальшого дослідження. Отримані колонії розміщують в рідку живильне середовище, на чому етапи виділення колонії анаеробних збудників можна завершити.

Її часто застосовують для виділення аеробних мікробів, що володіють високою кіслородочувствітельностью. У проведенні такого виділення культури аеробів застосовується методика обертання пробірок.

Методи засівання аеробних бактерій припускають виведення їх на агарізірованной розплавленої середовищі. Наявність інертного газу в пробірці дає можливість виростити ізольовані колони аеробних бактерій таким чином, що виділені культури аеробів добре можна побачити навіть неозброєним оком на 2-3 день.

Це методика виділення окремих бактеріальних клітин шляхом застосування мікроманіпулятора. Мікроманіпулятор являє собою спеціальний прилад, яким можна виловити з суспензії одну клітку, а також забезпечити можливість посіву культури в пробірку.

Подальша ідентифікація збудника проводиться з урахуванням всіх перерахованих властивостей збудника (аеробів і анаеробів), а також особливостей їх взаємодії з різними речовинами.

Тема №10 Фізіологія мікроорганізмів. Дихання бактерій. Способи культивування і виділення чистої культури анаеробів. Базові тести

1. Через 7 днів після пластичної операції, виконаної лікарем – стоматологом, у пацієнта розвився правець. Виникла підозра, що причиною був контамінований шовний матеріал збудником правця, який був доставлений в бактеріологічну лабораторію. Яке поживне середовище необхідно використати для первинного посіву:

С. Левенштейна – Йенсена.

D. *Кітта – Тароцці.

2. Третій етап виділення чистих культур анаеробів оснований на:

A. Отриманні ізольованих колоній бактерій.

B. Вивченні морфологічних та антигенних властивостей бактерій.

С. *Визначенні біологічних властивостей бактерій.

D. Створенні анаеробних умов для культивування бактерій.

E. Вивченні культуральних властивостей бактерій та пересіві ізольованих колоній для накопичення чистої культури..

3. Для виділення чистої культури збудника лаборант використав ексікатор з пірогалолом. Яку групу бактерій за типом дихання було виділено?

B. Облігатні анаероби.

С. *Облігатні аероби.

D. Капнофільні бактерії.

E. Факультативні анаероби.

4. При огляді хворого з некротичною флегмоною щелепо – лицьової ділянки в лікаря виникла підозра на газову гангрену. При мікроскопії гнійних виділень з рани виявлено грампозитивні мікроорганізми паличковидної форми. Яке живильне середовище слід використати для виділення чистої культури збудника?:

A. Молочно – сольовий агар.

B. Середовище Ендо.

С. Середовище Левіна.

D. М’ясо – пептоний агар.

E. *Середовище Кітта – Тароцці.

5. У хворого була виділена культура бактерій, що не росте в присутності кисню. Як забезпечити умови росту для цієї культури?

A. Використанням апарата Кротова.

B. Використанням сироваткового середовища.

С. Використанням печі Пастера.

D. *Використанням анаеростату.

E. Середовищами з окисним редокс - потенціалом.

6. За методом якого автора виділяють чисту культуру анаеробів?

7. Які основні правила взяття матеріалу для забезпечення адекватності результатів бактеріологічного дослідження?

A. Матеріал забирають з вогнища враження.

B. *Матеріал необхідно забирати до початку антимікробної терапії.

С. Матеріал забирають під час антимікробної терапії.

D. Матеріал забирають після оперативного втручання.

E. Матеріал необхідно вміщувати в холодильник.

8. Для мікробіологічної діагностики ранової анаеробної інфекції використовують наступний матеріал:

A. Випорожнення хворого.

С. *Перев’язочний матеріал, хірургічний шовк.

D. Мокроту хворого.

9. Для мікробіологічної діагностики ботулізму використовують наступний матеріал?

D. *Блювотні маси.

10. Культивування клостридій правця здійснюється:

A. Оптимальній температурі росту + 42 0 С.

B. На лужному бульйоні.

С. На середовище Леффлера.

D. *На середовище Кітта – Тароцці.

11. Для культивування патогенних анаеробів застосовують наступні поживні середовища:

A. Гліцериново - картопляне.

B. Жовчний бульйон.

С. М’ясо – пептоний жовчний агар.

D. Цукровий агар.

E. *Середовище Вільсон - Блера .

12. В бактеріологічну лабораторію поступив матеріал (перев’язочний матеріал) від хворого з підозрою на анаеробну ранову інфекцію. Який основний апарат необхідно для цього використати?

E. Сухожарову піч.

13. При бактеріологічному досліджені виділень з рани хворого з підозрою на анаеробну інфекцію, було виявлено грампозитивні мікроорганізми, які нагадували барабані палички. Наявність якого мікроорганізму можна представити?

Ротару :В 70 лет выгляжу на 45 благодаря простой методике...
Почему все аптеки молчат? Грибок ногтя боится как огня дешевого...
Алкоголику вместо кодирования подсыпьте незаметно 3-4 капли обычной…
Соломія Вітвіцька: живіт втягнувся за добу, вийшло 22 кг жиру! Їла це ...
Заросли папиллом на шее и в подмышках - признак наличия у вас...